N末端アミノ酸シーケンス

精製したタンパク質・ペプチドの溶液、または電気泳動後にPVDF膜へ転写したタンパク質をプロテインシーケンサーにて分析し、N末端アミノ酸配列を決定します。

  • エドマン分解法によるN末端アミノ酸配列解析を行います。
  • 国内での解析により、迅速に結果をお返しいたします。(1週間~10日)
  • 48,000円(税別)より解析を承っております。

価格

5残基まで:48,000円(税抜)
6残基目以降:4,500円/残基(税抜)

※試薬代の高騰に伴い、2016年9月1日より料金を上記の通り改訂いたしました。
ご理解をいただけますと幸いです。


納期

通常、サンプル到着後1週間程度で速報をメールでご連絡差し上げ、その後報告書を郵送にてお送りいたします。
お急ぎの場合はご相談ください。(状況により、追加費用が発生する場合があります)


ご注文方法

1. サンプル準備

<ブロッティング操作>

ブロッティング操作については、泳動槽の取り扱い説明書に従い、下記の注意事項を十分ご確認ください。

・転写緩衝液は、一般的なもの(例:3.3g/l Tris、14.4g/l グリシン、10-20%メタノール)を使用して下さい。その他の緩衝液(アミノカプロン酸、ホウ酸)でもかまいません。
・アミンは分析を妨害しますので、転写後の PVDF 膜をよくすすいで下さい(アミンを含まない緩衝液を使ってもすすぎは重要です)。
・メタノール濃度は高分子(5万以上)の場合は低めに、低分子(2万以下)の場合は多めがよろしいです。
・充分に転写されるようであれば、特に添加物は必要ありません。塩基性蛋白質や高分子(10万以上)の場合、0.01%SDS を加えると転写効率が改善する場合があります。
・使用する膜は、ミリポア製イモビロン P を推奨しております。ニトロセルロース膜は絶対に使用しないで下さい。
・低分子(1万~)の場合は、イモビロン P_SQ という厚めの膜の方が良いと言われております。

<ブロッティング後の操作>

解析には、PVDF膜をアミノ酸やタンパク質で汚染させない事が最も重要です。下線部分をご注意の上、サンプルをご準備ください。

1)転写済みのPVDF膜を0.1%クマシーブリリアントブルーR250、50%メタノール溶液に浸漬します。染色液はゲル用を使い回ししないで下さい。容器とピンセットは清浄したものを使用して下さい。抗体染色など他の用途と併用しないで下さい。
2)1分程度緩やかに震盪し、膜全体が染まったら、染色液を捨てます。
3)50%メタノールを加え、30秒程度緩やかに震盪した後、液を捨てます。
4)バックグランドが脱色され、タンパク質のバンドが見えるまで3)の操作を繰り返します。タンパク質のバンドを消さないように注意して下さい。
5)新しい容器に膜を移し替え、超純水(ミリQ)ですすぎます。60秒程度震盪した後、液を交換します。これを10回繰り返して下さい。
6)濾紙上で膜を乾燥させます。PVDF膜は濡れていると透明感があります。乾いて光沢のない白になるまで乾かします(この段階では濾紙はまだ濡れています)。
7)濾紙を交換してPVDF膜を乾かします。濾紙が濡れなくなるまで交換して乾かして下さい。
8)乾いたPVDF膜から、ディスポーザブルの剃刀で目的バンドを切り取り、エッペンドルフチューブに入れて常温で発送してください。膜の乾燥が不完全でも冷蔵発送であれば問題ございません(乾燥の目的は微生物汚染を防ぐためです)。

2. ご注文

ご発注には、ご注文時のご注意をご一読の上、以下のWebフォームに必要事項をご記入ください。
自動返信にて、サンプル発送方法等をお返事差し上げます。
N末端アミノ酸シーケンスご注文フォーム

<注意事項>

・ご発注時に試料の到着日をご連絡ください
・土日祝祭日はお送りいただいた試料を受け取ることができません。大変申し訳ございませんが、平日の到着指定をお願いいたします。
・ご提供いただきました試料のうち、分析に使用した試料はご返却することができません。分析に使用しなかった残試料に関しましては、ご注文時にご連絡いただき、着払いの場合のみご返却可能です。予めご相談ください。
・分析結果は、予め到着日をお知らせ頂いた上で、原則到着日から数えて10営業日以内に速報をメールにてご連絡、その後報告書を郵送いたします。
但し下記の場合、ご報告がそれよりも遅れる場合がございます。何卒ご了承ください。
⇒機器不良のため分析が直ちに行えない場合
⇒繁忙期の場合(年末・年度末など)
⇒ご依頼いただいた試料数・残基数が多い場合
・お急ぎの場合は、正式注文前にご相談ください。可能な限りご対応致します。
・やむを得ない事情(機器不良、作業担当者の操作ミス等)以外のやり直し分析には別途料金が発生いたします。
・試料の純度、量、及びN末ブロック等の原因により、明瞭な結果が得られない場合がございます。
・その他疑問点等ございましたらお気軽にお問い合わせ下さい。

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